Тоби Магуайр
В роли: Peter Parker / Spider-Man (голос)

Альфред Молина
В роли: Dr. Otto Octavius / Doc Ock (голос)

Кирстен Данст
В роли: Mary Jane Watson (голос)

Брюс Кэмпбелл
В роли: Narrator (голос)

Джон Ди Маджио
В роли: Rhino / Security Guard / Thug (голос)

Ди Брэдли Бейкер
В роли: Puma / Mysterio / MysterioBot / Train Conductor / Bank Teller / Scientist (голос) (как Dee Baker)

Минди Стерлинг
В роли: Aunt May / Female Pedestrian / Female Scientist (голос)

Чарлз Клаусмейер
В роли: Thug / Security Guard / Pedestrian (голос)

Jay Gordon
В роли: Thug / Police Officer (голос)

Джо Элэски
В роли: Thug (голос)

William Schneider
В роли: Thug (голос)